不同浓度的蒲公英甾醇对HepG2细胞抑制效果的研究

吴禹岐,李涛,金哲,黄佳悦

摘要：蒲公英具有抗炎、抗菌以及抗氧化等多种作用，经过大量研究发现其内含有多种有效物质，其中较为有效的药物成分为蒲公英甾醇。本文通过采用在体外培养细胞的方法，观察在不同浓度的蒲公英甾醇作用下，肝癌细胞HepG2生长的影响，利用MTT比色法显示蒲公英甾醇在不同浓度不同时间内的抑制效果。结果表明，不同浓度和时间的蒲公英甾醇均对肝癌细胞HepG2起到一定的抑制作用，HepG2细胞的抑制情况随蒲公英甾醇浓度和时间的增加而增大。

关键词：蒲公英甾醇；HepG2；抑制；MTT

近几年癌症的发病率越来越高，恶性肿瘤之一肝癌占我国恶性肿瘤的第三位。近年来，中医药在治疗原发性肝癌方面取得一些进展[1]。蒲公英(Herba Taraxaci)为菊科植物蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand-Mazz)的干燥全草，其可用于治疗湿热黄疸、肺痈以及热淋等疾病[2]。本实验的目的在于研究蒲公英甾醇对肝癌细胞HepG2抑制效果的影响，从而进一步为医学上研发治疗肝癌的药物提供理论依据。

1实验材料与方法[1]

1.1实验仪器

恒温水浴锅（HH-601）；离心机（Allegra 64R Centrifuge）；倒置显微镜（IX70）；恒温培养箱（NU-5810E）；超净工作台（BHC-1300IIA2）。

1.2实验试剂

DMEM培养基(购于美国)；HepG2（牡丹江师范学院生命科学与技术学院留存）；蒲公英甾醇（购于四川省维克奇生物科技有限公司）；MTT溶液（购于上海蓝季生物）；DMSO溶液（SIGMA-ALDRICH）；胰蛋白酶（源叶生物）；胎牛血清（购于赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司）。

1.3实验方法

取0.0196g蒲公英甾醇粗品，将其加入到0.46mL的DMSO溶液中溶解配成母液浓度为100mmol/L的蒲公英甾醇溶液，对其进行浓度梯度稀释为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L，将其作用于HepG2细胞使给药后的终浓度分别为10μmol/L 、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L五个浓度梯度。完成后分别记录下加药的时间，随后仍将HepG2细胞继续放入CO2培养箱中对其进行培养。作用24h和48h记录结束后，采用MTT法研究其抑制效果[6]。

2 结果与分析

2.1不同浓度的蒲公英甾醇溶液对HepG2抑制率的影响

即在蒲公英甾醇作用细胞24h后，当浓度为10μmol/L时对HepG2的抑制率是4.09%；当浓度为20μmol/L时对HepG2的抑制率是9.36%；当浓度为50μmol/L时对HepG2的抑制率是18.13%；当浓度为100μmol/L时对HepG2的抑制率是21.64%；当浓度为200μmol/L时对HepG2的抑制率是28.07%。

图124h五种不同浓度对HepG2的抑制率

Fig. 4 Five different concentrations of HepG2 inhibition rate in 24h

蒲公英甾醇作用细胞48h后，当浓度为10μmol/L时对HepG2的抑制率是7.60%；当浓度为20μmol/L时对HepG2的抑制率是21.64%；当浓度为50μmol/L时对HepG2的抑制率是24.00%；当浓度为100μmol/L时对HepG2的抑制率是24.56%；当浓度为200μmol/L时对HepG2的抑制率是39.77%。

图2 48h五种不同浓度对HepG2的抑制率

Fig. 5 Five different concentrations of HepG2 inhibition rate in 48h

3讨论

近年来有研究发现，蒲公英其作用机制可能与两药联合能将肿瘤细胞阻滞于G2-M期有关。蒲公英甾醇类物质在体外研究中也初步发现了具有一定的抗癌作用，其具体作用的机制还有待进一步的深入研究。本实验通过MTT实验观察了蒲公英甾醇溶液在浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L对人体HepG2生长抑制效果的影响。在作用24h后，蒲公英甾醇浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L时对肝癌细胞HepG2的抑制率分别为4.09%、9.36%、18.13%、21.64%、28.07%，在作用48h后，蒲公英甾醇浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L时对肝癌细胞HepG2的抑制率分别为7.60%、21.64%、24.00%、24.56%、39.77%。实验证明，不同浓度的蒲公英甾醇溶液对HepG2的抑制率大小也不同，在作用24h和48h时随着溶液浓度越高对肝癌细胞的抑制率越大，由此表明在初步实验研究下蒲公英甾醇对HepG2增殖具有一定的抑制作用，但对于其它的时间段和浓度蒲公英甾醇对HepG2生长抑制作用的机制还有待进一步的探索和研究。

参考文献

[1] 路军华,孙勃,陈清海.原发性肝癌中医药治疗的进展[J].中国城乡企业卫生,2009,12(6):99-103.

[2] 路宝通,张鸯,胡新安.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用[J].中国兽医杂志, 2008,44(5):45-47.

[3] Hu C,Kitts D D. Antioxidant,prooxidant, and cytotoxic activities of solvent-fractionated dandelio

n (Taraxacum of ficinale) flower exyracts in vitro[J].J Agric Food Chem,2003,51(1):301.

[4] 吕俊华,邱士翠,张连同,等.蒲公英体外抑菌作用研究[J].时珍国医国药,2002,13(4):215-216.

[5] GKristo T S,Terdy P P,Simandi B,et al.Efficiency of supercritical fluid extraction for the production of non-volatile terpenoids from Taraxaci radix [J]. Acta Pharm Hung,2001,71(3):318.

[6] 皮至明.免疫学及免疫学检测技术[M].北京:高等教育出版社,2005.

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第一作者：吴禹岐（1991—） ，女，汉族，硕士研究生，从事动物学研究。

基金项目：黑龙江省基本科研业务费（批准号：1354MSYQN026）；牡丹江师范学院项目（批准号：QN2021006）;黑龙江省基本科研业务费（批准号：1354MSYQN024）；