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  • 简介:摘要:食品安全是一个越来越引起人们重视的问题,不仅影响到人们的生活、工作和健康,更是关系到国计民生的大事。在各种食物中毒中,细菌性食物中毒是食物中毒的主要因素。多重 PCR是通过在同一个 PCR反应体系中,引用多对引物,同时完成多个特异性目的基因片段的扩增方法,具有高效、系统、经济简易的优点。本文对多重 PCR技术在食品病原细菌检测中的应用进展进行了综述。

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  • 简介:摘要荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、精确度高、检测范围宽、重复性好优势,本文就其方法对水体中的微囊藻进行检测。

  • 标签: 荧光定量PCR 微囊藻毒素 检测
  • 简介:Objective:Tocomparethesensitivityandspecificityofthecervical/urethralswabswithvoidedurinespecimensforthedetectionofgenitourinarytractinfectionwithChlamydiatrachomatisanddeterminewhetherurinespecimenscanreplacethecervical/urethralswabsindetectionofC.trachomatis.Methods:Thematchedcervical/urethralswabsandvoidedurinespecimenswerecollectedfrom569patientsofSTDclinics.Polymerasechainreaction(PCR)assayspecificforC.trachomatisplasmidDNAandrapidantigentesting(Clearviewassay)wasusedtodetectC.trachomatis.Standardcriteriathatdefined""""true""""positiveincluded:1)positivePCRresultsbothincervical/urethralswabandvoidedurinespecimenor2)positivevoidedurineresultsbothbyPCRassayandclearviewtestor3)positiveresultsinbothPCRassayofcervical/urethralswabandclearviewtestofvoidedurine.Forstatisticalanalysis,thechi-squaretestwasused.Results:TheprevalenceofC.trachomatisinpatientswithsymptomswas12.1%(28/231)inwomenand10.4%(10/96)inmen,withnosignificantdifferencebetweenthem(x^2=0.21,P>0.05).TheprevalenceofC.trachomatisinpatientswithnosymptomswas11.0%(11/100)inwomenand15.5%(22/142)inmen,withasignificantdifferenceexistingbetweenthem.(x^2=4.0,P<0.05).Nosignificantdifference(P>0.05)existedbetweenPCRtestingofswabs(sensitivity87.3%;specificity99.2%)andPCRtestingofurine(sensitivity88.7%;specificity98.8%).Asforclearviewassay,sensitivitywas60.6%andspecificitywas100%.Conclusions:PCRassayissuperiortoclearviewindetectingC.trachomatis.AlthoughbothPCRtestingofswabsandPCRtestingofurinespecimensbothhavehighsensitivityandspecificity,urinespecimentestingismorecost-effective,practicalandnoninvasive.ThusurinespecimenscantaketheplaceoftheswabsinPCRtestingforchlamydia.

  • 标签: 泌尿生殖器 衣原体感染 尿液检查 PCR化验 传染病
  • 简介:利用多重PCR和单重PCR技术对部分市售肉制品、宠物食品以及饲料等进行检测.以确定产品中是否含有动物源性成分以及动物源性成分的种类。利用SDS细胞裂解法提取样品DNA,用琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物的种类、上述方法具有操作简便,快速准确.节省费用等特点.

  • 标签: PCR技术 肉种类 动物源成分
  • 简介:目的建立一种准确、可靠的鉴定都柏林念珠菌基因型的方法。方法临床念珠菌分离自临床生殖器念珠菌病患者,45℃温度试验时几乎不生长,且其他表型实验结果也符合都柏林念珠菌特征。对41例临床念珠菌和1例白念珠菌标准株、1例都柏林念珠菌标准株rDNA内部转录间隔区的基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增,HpyF10Ⅵ酶切后观察PAGE图谱。结果聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)后,39例临床�

  • 标签: 念珠菌鉴定 都柏林念珠菌
  • 简介:目的:探讨荧光定量PCR仪检测疟原虫的应用价值。方法:选取我省出入境单位收集到的已经镜检法证实为恶性疟疾的全血样本32例、镜检为阴性的全血样本13例作为研究对象,所有样本中均提取DNA并加入RT-PCR检测试剂进行荧光定量PCR仪检测,观察分析检测结果。结果:荧光定量PCR仪检测结果显示:恶性疟疾全血样本23例、间日疟疾全血样本11例,阴性全血样本11例,诊断符合率95.6%。复检结果显示:2例标本通过PCR扩增、序列对照,发现其测序结果与公布的疟原虫序列一致,确定均含有疟原虫。结论:荧光定量PCR仪检测疟原虫的应用价值高,能够敏感、可靠的检出疟原虫DNA。

  • 标签: 荧光定量PCR仪 疟原虫 疟疾诊断
  • 简介:目的:建立党参的ISSR-PCR反应体系,为今后利用ISSR标记技术进行党参鉴定及种质遗传多样性分析提供一个标准化程序.方法:采用试剂盒法提取党参基因组DNA为模板,通过单因素实验分析了ISSR-PCR反应体系中MgCl2、dNTPs、引物浓度、TaqDNA聚合酶、模板DNA用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响.结果:建立了重复性好,分辨率高的ISSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCRBuffer缓冲液2.5μL,MgCl22.0mmol·L-1,dNTPs0.5mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA为30ng;扩增程序为:94℃预变性5min,然后94℃变性30s,51.7℃退火1min,72℃延伸1.5min,共计35个循环,循环结束后在72℃延伸7min,4℃保存.结论:建立了适用于党参的ISSR-PCR反应体系,为应用ISSR技术鉴定党参种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础.

  • 标签: 党参 ISSR-PCR 反应体系 优化
  • 简介:以期建立可用于地龙ISSR-PCR分析的最佳反应体系和扩增程序,模板DNA的量、引物浓度、镁离子浓度和Taq酶的量、引物退火温度等都会影响ISSR扩增,将地龙ISSR-PCR扩增体系中的dNTPs浓度定为0.2mmol·L-1

  • 标签: 体系建立 反应体系 地龙反应
  • 简介:确定了引物809以柴胡基因组DNA为模板扩增的最佳退火温度为54.5℃(见图2a),因此选择0.3μmol/L作为柴胡ISSR-PCR反应体系中最佳的引物浓度,本实验在25μlISSR-PCR反应体系中对TaqDNA聚合酶设置了0.5

  • 标签: 体系建立 反应体系 建立优化
  • 简介:AllfactorsaffectingthePCRsysteminPinusmassonianaLambwereinvestigatedonebyone.TheresultsshowthattheoptimumPCRsystemofEST-SSRwere:2μL10×Buffer(Mg2+Free),30ngtemplateDNA,0.1875mmol/LdNTPs,3.75mmol/LMg2+,8pmolprimerpair,1.0UTaqDNApoly-meraseintotal20μLreactionsystem.Finally,atotalof11isolatesofP.massonianawasusedfortestingthestabilityofthePCRamplification.TheresultsprovethattheoptimumPCRsystemwasstable,reliable,highlyrepetitive.

  • 标签: PINUS massoniana EST-SSR MARKER single FACTOR
  • 简介:摘要:在当今社会迅速发展的今天,人们越来越关心食物的质量与安全问题。为了更好地保证食物的可食用质量与营养价值,必须加大对食物的检测力度。PCR技术是一种普遍存在的食品检测技术,为了加强PCR在特定实践工作中的应用效果,本文重点介绍了PCR技术的检测价值以及它的操作方法,并对它在食品检测工作中的具体应用进行了剖析,其主要目的是为有关食品检测技术创新以及实际应用提供一些可资借鉴的信息。

  • 标签: 食品检测 PCR技术 应用分析
  • 简介:摘要:PCR技术在食品工程中因具有特异性、敏感性、便捷等明显优势而应用日益广泛。PCR技术是一种在体外扩增基因的方式,主要机理是DNA会在高温下变性,成为单链,然后经过低温退火,单链与引物按照碱基互补配对的原则进行结合,再将温度升高至反应最适的温度,在DNA聚合酶的作用下形成互补链,再对新的DNA链解链,重复上述步骤,循环复制。PCR反应中应用的是耐高温的聚合酶,一般在2-4h就可以完成扩增,且至少扩增100万倍。本文就PCR技术应用于食品工程中展开探讨 。

  • 标签: PCR技术 食品工程 应用
  • 简介:摘要:食品安全对人们的生命安全有着至关重要的影响,而食品安全检测对食品工程来说是一项不可或缺的程序,所以相关部门必须重视食品安全检测,防止不合格食品在市场中出现。

  • 标签: PCR技术 食品工程 过程探讨
  • 简介:摘要:食品安全对人们的生命安全有着至关重要的影响,而食品安全检测对食品工程来说是一项不可或缺的程序,所以相关部门必须重视食品安全检测,防止不合格食品在市场中出现。不过,在食品安全检测的实际过程中还存在一系列的问题,一些较为常规的检测方法无法检测出某些病菌,检测时所花费的时间也过于长久,对于食品的保质期有着严重的影响。于是,快捷且简单的PCR检测技术应运而生,对细菌尤其敏感,可将微生物和存在的细菌直接检测出来,目前已被广泛应用到我国食品工程方面,并且拥有无可比拟的优越性。

  • 标签: PCR技术 食品工程 检测
  • 简介:摘要:PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染,环保型建筑装饰材料在实验室建造中占据重要组成部分。随着国家对PCR实验室建设要求的提高,推进现有重点实验室结构的优化调整,积极促进自我特色与优势的建设,需要为了能给客户打造安心实验室而不懈努力。当然,良好的实验室环境可以提升人员工作效率,因此PCR实验室的布局设计和环境材料的使用就显得非常重要。本文着重对PCR实验室布局、工作区域划分及材料要求等进行阐述。

  • 标签: PCR实验室 布局 装饰设计 材料
  • 简介:[摘要] 炭疽是一种烈性传染病,17世纪欧洲曾发生过一次炭疽大流行,导致约6万人丧生。2001年炭疽首次被真正作为生化武器用于恐怖袭击。建立一种快速敏感特异的检测体系对于炭疽诊断是十分必要的。本研究中我们建立了快速鉴别炭疽芽孢杆菌的PCR体系,用相关菌种进行了特异性评价,并用模拟粪便标本对该体系开展了临床应用价值的评价。

  • 标签: 炭疽芽孢杆菌 PCR反应 模拟标本
  • 简介:【摘要】目的:分析实时定量PCR实验室开展强化管理对污染的预防效果。方法:我中心于2020年6月在实时定量PCR实验室开展强化管理,分别于强化管理开展前(2019年6月-2020年5月)、强化管理开展后(2020年6月-2021年5月)对工作人员项目合格率进行对比。结果:强化管理后,工作人员操作流程知晓、污染来源知晓、个人防护措施、手卫生、污物处理、高压消毒锅使用等检查项目合格率均较强化管理前更高,数据差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实时定量PCR实验室开展强化管理有助于提高工作人员防范意识,做好污物处理,避免污染发生,值得推广。

  • 标签: 实时定量PCR实验室 管理 污染预防
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  • 简介:目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体(Treponemapallidum,TV)DNA多聚酶I(polA)基因序列,设计MGB—Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。

  • 标签: 梅毒螺旋体 DNA多聚酶I基因 聚合酶链反应 荧光定量聚合酶链反应 MGB—Taqman探针
  • 简介:目的应用PCR检验技术在口岸进行鼠疫检测,以提高鼠疫诊断的准确性和灵敏度,建立适合于口岸鼠疫检测的快速诊断方法,提高鼠疫检测水平.方法首先,根据口岸地区样品的特点确定相应PCR检测方法,然后对样品进行PCR检测、鼠疫细菌学检验和反向间接血球凝集试验.结果形成了一套适合于口岸地区鼠疫PCR检测的方法,灵敏度为7cfu的鼠疫菌.PCR反应体系中以dUTP代替DTTp,加入UDG酶防止产物污染,对特异性和敏感性无影响.对在口岸地区采集的鼠类标本111份、进口旱獭皮张500份进行了PCR检测,并分别进行鼠疫细菌学、反向间接血球凝集试验.PCR检测出3份阳性鼠类标本,与鼠疫细菌学检验结果一致:对进口旱獭皮张的PCR检测和反向间接血球凝集试验均为阴性.结论经实验研究建立了一套完整的鼠疫PCR检测方法,本方法特异性和敏感性强、操作简便、快捷、成本较低,适合在口岸地区推广应用.

  • 标签: PCR技术 口岸 鼠疫 监测 细菌学检验 反向间接血球凝集试验