简介：摘要目的运用不同药物诱导肾小管上皮细胞衰老模型并进行比较。方法分别用不同浓度D-半乳糖(D-gal)、过氧化氢(H2O2)、顺铂(CDDP)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK2)，采用CCK8法检测细胞活性及半数抑制浓度(IC50)；衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老水平；蛋白免疫印迹法(western blotting)分析衰老相关基因表达；流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡。通过苏木精-伊红(HE)染色观察D-gal模型鼠和自然衰老鼠的肾小管及间质病理变化，免疫组化检测p16表达水平。结果CCK8结果显示，体外给予3种药物处理后HK2活性均受到抑制，48 h IC50值分别为D-gal(365.8±9.7)mmol/L、H2O2(385.4±20.8)μmol/L、CDDP(8.4±1.6)μmol/L。光镜下可见3组HK2细胞生长均减慢，且SA-β-gal阳性率较对照组均增加(P<0.05)。400 mmol/L D-gal和400 μmol/L H2O2处理后G0/G1期细胞较对照组分别增加(22.9±1.0)%和(13.0±4.4)%，而8 μmol/L CDDP组G2/M期细胞增加(14.4±1.9)%(t＝48.07、6.40、16.53，均P<0.05)。与对照组，400 μmol/L H2O2和8 μmol/L CDDP处理后HK2凋亡分别增加(50.3±1.0)%和(41.9±2.0)%，明显高于400 mmol/L D-gal组(7.7±0.4)%(t＝77.47、33.73、28.35，均P<0.05)。Western blotting结果提示3种药物达到一定浓度后，HK2细胞CCND1蛋白表达均下调。D-gal组p16表达上调(F＝92.88，P<0.05)，而H2O2和CDDP组p16的表达差异无统计学意义。实验结果显示，D-gal模型鼠可见与自然衰老鼠相似的肾小管上皮细胞数目减少、基底膜增厚、间质增宽，且肾小管上皮细胞p16表达增加。结论比较3种不同造模方式诱导的HK2衰老，D-gal诱导的肾小管上皮细胞衰老模型相对接近自然衰老。

简介：摘要食管上段胃黏膜异位(heterotopic gastric mucosa in the upper esophagus，HGMUE)在临床工作特别是胃镜检查过程中并不少见，但由于临床医生的关注程度不够且好发部位靠近食管入口处，因此常常被医患所忽视。近年来很多学者发现HGMUE与咽喉反流症状相关，并因此开始对HGMUE加以关注，但是关于其临床症状产生的原因目前尚存争议。针对HGMUE临床症状的研究能够明确该病变与咽喉反流之间的关系，为相关疾病的诊疗提供帮助，本文就近年来有关HGMUE的文献作一综述。

简介：摘要目的验证末端尿苷基转移酶(TUT4)通过影响miR132/212簇的尿苷化作用影响食管上皮细胞(HEEC)的放射敏感性。方法本研究通过PCR的方法检测0、2、4、6和8 Gy X射线照射后0、6、18、24和48 h HEEC中TUT4的表达。将细胞分为阴性对照组、下调TUT4表达组(shTUT4组)、单纯6 Gy照射组(6 Gy组)、6 Gy照射+下调TUT4表达组(6 Gy+shTUT4组)分别检测TUT4对细胞放射敏感性、细胞增殖、细胞周期、线粒体损伤、氧自由基产生的影响；通过PCR检测下调TUT4表达对miR132/212尿苷化的影响；克隆形成和增殖实验检测过表达miR132/212及miR132/212+UUU(末端添加3个尿嘧啶的miR132/212)时HEEC的放射敏感性；增殖实验检测在下调TUT4表达且过表达miR132/212及尿苷化miR132/212时HEEC的增殖情况。结果PCR结果显示，2、4、6和8 Gy X射线照射后TUT4表达增加，差异有统计学意义(t＝12.84、62.06、27.86、32.43，P<0.05)。下调TUT4表达可增加HEEC的放射敏感性，D0、Dq、SF2值分别为0.79、1.61、0.47，与对照组比较差异有统计学意义(t＝13.2、5.85、7.31，P<0.05)，放射增敏比(SERD0)为1.41；且经6 Gy照射后，低表达TUT4组细胞增殖减少(t＝7.12、13.63，P<0.05)、S期细胞增加(t＝11.98，P<0.05)、线粒体损伤增加(t＝11.98，P<0.05)、氧自由基产生增加(t＝15.65，P<0.05)。进一步研究结果表明，下调TUT4表达可使miR132/212表达增加，miR132/212+UUU表达减少(t＝27.90、60.99，P<0.05)；而过表达miR132/212和miR132/212+UUU也可影响HEEC的放射敏感性，SERD0分别为1.20、0.71。双重转染实验证明，TUT4低表达且miR132/212过表达细胞的增殖能力较单纯TUT4低表达时更弱(t＝4.76、7.65，P<0.05)；同时TUT4低表达且过表达miR132/212+UUU时细胞增殖能力较单纯TUT4低表达更强，差异有统计学意义(t＝7.22，P<0.05)。结论X射线可增加HEEC中TUT4的表达，TUT4可降低HEEC放射敏感性、减轻放射损伤，其机制与miR132/212的尿苷化相关。

简介：无

简介：摘要目的探讨虫草素对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，以1×105/mL接种于细胞培养板，并将传至第3代的细胞分为正常对照组（Ctrl组）、LPS组（1 mg/L的LPS刺激细胞）、10 μmol/L和20 μmol/L虫草素干预组（LPS+C 10组、LPS+C 20组）。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）染色法检测细胞内活性氧（ROS）水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测炎症相关因子细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）以及核转录因子-κB（NF-κB）的蛋白表达。结果与Ctrl组比较，LPS可明显抑制NRK-52E细胞活性，增加细胞内ROS含量，上调ICAM-1、VCAM-1、IL-1β以及NF-κB的蛋白表达。与LPS组比较，经10 μmol/L或20 μmol/L虫草素处理后，NRK-52E细胞活性明显升高（以Ctrl组为1：0.717±0.017、0.916±0.036比0.554±0.046），细胞内ROS水平明显降低（以Ctrl组为1：1.527±0.165、1.098±0.168比2.543±0.127），同时ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB的蛋白表达均明显下调〔以Ctrl组为1：ICAM-1/GAPDH为2.364±0.097、1.561±0.074比3.101±0.121，VCAM-1/GAPDH为2.866±0.135、1.920±0.098比4.170±0.119，IL-1β/GAPDH为2.358±0.107、1.563±0.179比3.301±0.210，磷酸化NF-κB p65（NF-κB p-p65）/GAPDH为2.559±0.166、1.596±0.148比3.183±0.098〕，差异均有统计学意义（均P<0.05）；且与LPS+C 10组比较，LPS+C 20组细胞活性更为显著（0.916±0.036比0.717±0.017，P<0.01），ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB蛋白表达下调更加明显（ICAM-1/GAPDH：1.561±0.074比2.364±0.097，VCAM-1/GAPDH：1.920±0.098比2.866±0.135，IL-1β/GAPDH：1.563±0.179比2.358±0.107，NF-κB p-p65/GAPDH：1.596±0.148比2.559±0.166，均P<0.05）。结论虫草素可显著增加LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的细胞活性，降低细胞内ROS水平，抑制细胞炎症，其抑制炎症作用可能与NF-κB通路相关。

简介：摘要目的探讨微小RNA-325(miRNA-325)在肾小管上皮细胞缺氧复氧(H/R)损伤模型中的作用及其机制。方法选取人肾小管上皮细胞HK-2，建立适当的肾小管上皮细胞H/R模型(缺氧24 h复氧2 h)。将HK-2细胞分为对照组、H/R组、H/R+抑制剂(inhibitor)组和H/R+抑制剂阴性对照(inNC)，转染miRNA-325 inhibitor和inNC后进行缺氧复氧处理，然后进行后续实验。用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测HK2细胞在H/R后活化半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)等的表达水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HK2细胞中miRNA-325、Caspase-3和XIAP mRNA表达水平。使用双荧光素酶报告基因实验检测miRNA-325与XIAP 3’端非编码区(3’UTR)之间的关系。组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果H/R组细胞凋亡率高于对照组[(12.11±1.65)%比(3.88±0.24)%，t＝8.311，P<0.05]；H/R+Inhibitor组细胞凋亡率低于H/R组[(7.60±3.07)%比(12.11±1.65)%，t＝4.557，P<0.05]。Western blot结果显示，实验组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)、(0.63±0.01)、(0.61±0.02)比(0.41±0.01)，F＝212.095，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)、(0.63±0.01)、(0.64±0.04)比(0.41±0.02)，F＝105.138，P<0.05]蛋白表达量显著高于对照组，bcl-2[(0.57±0.02)、(0.52±0.02)、(0.49±0.01)比(0.62±0.02)，F＝89.498，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)、(0.24±0.03)、(0.24±0.01)比(0.33±0.03)，F＝27.575，P<0.05]表达量显著低于对照组；H/R+Inhibitor组Cleaved Caspase-3[(0.50±0.02)比(0.61±0.02)，t＝11.437，P<0.05]和bax[(0.53±0.02)比(0.64±0.04)，t＝7.253，P<0.05]的表达低于H/R组，bcl-2[(0.57±0.02)比(0.49±0.01)，t＝9.471，P<0.05]和XIAP[(0.29±0.01)比(0.24±0.01)，t＝4.231，P<0.05]的表达量高于H/R组，差异均有统计学意义。qRT-PCR结果显示，实验组miRNA-325[(7.27±0.30)、(4.66±0.21)、(7.11±0.25)比(1.05±0.13)，F＝1453.045，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.52±0.05)、(1.26±0.06)、(1.53±0.05)比(1.00±0.01)，F＝241.375，P<0.05]表达水平显著高于对照组，而XIAP mRNA[(0.38±0.01)、(0.76±0.02)、(0.39±0.02)比(1.01±0.02)，F＝2569.583，P<0.05]表达低于对照组；H/R+Inhibitor组miRNA-325[(4.66±0.21)比(7.27±0.30)，t＝24.236，P<0.05]和Caspase-3 mRNA[(1.26±0.06)比(1.52±0.05)，t＝11.451，P<0.05]低于H/R组，而XIAP mRNA[(0.76±0.02)比(0.38±0.01)，t＝45.678，P<0.05]高于H/R组，差异均有统计学意义。荧光素酶活性检测表明共转染miRNA-325的野生型组酶活性低于对照组[(0.69±0.03)比(1.01±0.02)，t＝22.809，P<0.05]，而突变型组酶活性无明显变化[(1.04±0.11)比(0.99±0.06)，t＝0.983，P>0.05]。结论XIAP是miRNA-325的靶基因之一，抑制miRNA-325可以下调凋亡蛋白的表达，降低细胞凋亡率，从而保护肾小管上皮细胞。

简介：摘要目的探讨microRNA-145(miR-145)靶向沉默PLK1基因对肾小管上皮细胞增殖、凋亡的影响及相关机制。方法采用lipofectamine 2000试剂将miR-145转染肾小管上皮细胞，按不同转染结果分为对照组、阴性对照组及miR-145转染组，采用RT-PCR法检测肾小管上皮细胞中miR-145水平，采用CCK-8实验检测细胞增殖能力，采用流式细胞术检测细胞转染miR-145后细胞周期的分布，采用Western blot实验检测胃癌细胞Bax、Cyclin B1、PCNA及Bcl-2的表达水平，采用荧光素酶报告实验检测miR-145与PLK1基因的靶向关系。结果RT-PCR实验显示miR-145转染组肾小管上皮细胞miR-362表达水平(4.1±0.6)显著高于对照组(1.2±0.2)和阴性对照组(1.3±0.3)(P<0.05)。CCK-8实验显示肾小管细胞转染miR-145后，肾小管细胞的增殖水平低于对照组及阴性对照组(P<0.05)。采用流式细胞术显示各组肾小管细胞G0/G1期比例比较，差异无统计学意义(P>0.05)。miR-145转染组肾小管细胞S期比例为(14.16±2.82)%，显著低于对照组[(21.22±3.81)%]及阴性对照组[(22.56±2.69)%](P<0.05)；miR-145转染组肾小管细胞G2/M期比例为(26.37±4.51)%，显著高于对照组[(24.57±2.02)%]及阴性对照组[(22.46±2.74)%](P<0.05)。miR-145组Bax相对水平为(0.36±0.04)，显著高于对照组(0.25±0.03)及阴性对照组(0.24±0.04)(P<0.05)。miR-145组Cyclin B1、PCNA、Bcl-2相对水平分别为(0.18±0.03)、(0.27±0.03)、(0.16±0.02)，显著低于对照组[(0.28±0.02)、(0.36±0.04)、(0.32±0.03)]及阴性对照组[(0.30±0.03)、(0.40±0.03)、(0.33±0.03)](P<0.05)。通过生物信息学预测结果显示miR-145可与PLK1基因的3'-UTR结合，经荧光素酶报告基因实验进行验证，显示肾小管细胞在共转染miR-145及PLK1野生型载体后，荧光素酶相对活性显著下降(P<0.05)，其他各实验组的肾小管上皮细胞的荧光素酶相对活性无明显下降(P<0.05)。RT-PCR实验显示miR-145转染组肾小管上皮细胞PLK1基因表达水平(0.31±0.13)显著低于对照组(1.03±0.15)及阴性对照组(1.04±0.17)(P<0.05)。结论miR-145可靶向抑制肾小管上皮细胞中PLK1基因表达水平，抑制细胞的增殖能力，诱发细胞发生凋亡，为肾纤维化治疗提供实验依据。

简介：摘要目的探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）是否通过诱导肾小管上皮细胞发生程序性坏死和凋亡促使肾小管上皮细胞过度丧失。方法选取6~8周龄C57BL/6雄性小鼠，将其随机分为对照组（n=10）和AngⅡ诱导的高血压肾损害模型组（n=30），通过皮下植入的渗透性微型泵分别持续给予0.9%无菌生理盐水或AngⅡ（1.5 μg·kg-1·min-1）14 d（n=10）、21 d（n=10）和28 d（n=10）。采用qPCR和病理染色法分别检测AngⅡ诱导的不同时间点模型组小鼠肾组织中RIP3、MLKL和caspase-3 mRNA和蛋白的表达。流式细胞术和Western印迹法分别检测不同浓度（10-10~10-5 mol/L）AngⅡ处理HK-2细胞的凋亡和坏死情况及RIP3、MLKL和cleaved caspase-3的蛋白表达。将HK-2细胞分为对照组、AngⅡ诱导组、程序性坏死特异性抑制剂Nec-1（100 μmol/L）组和凋亡抑制剂zVAD（10 mol/L）组，采用免疫荧光检测各组HK-2细胞TUNEL和RIP3中的阳性表达。结果qPCR和免疫组化染色检测结果发现，AngⅡ诱导14 d后模型小鼠肾组织caspase-3 mRNA和cleaved caspase-3蛋白表达均明显高于对照组、21 d模型组和28 d模型组；AngⅡ诱导21 d后RIP3、MLKL mRNA和蛋白表达均明显高于对照组、14 d模型组和28 d模型组。PAS染色结果显示，与对照组相比，AngⅡ诱导的高血压肾损害小鼠肾小管呈明显的坏死形态学特征。流式细胞术检测结果显示，与对照组相比，各浓度的AngⅡ均可诱导HK-2细胞发生程序性坏死和凋亡（均P<0.05），但10-9 mol/L AngⅡ组细胞坏死率最高，而10-7 mol/L AngⅡ组细胞早期凋亡率最高。Western免疫印迹分析结果显示，与对照组相比，各浓度的AngⅡ组RIP3、MLKL和cleaved caspase-3表达均增高，在10-9 mol/L AngⅡ组RIP3和MLKL表达最高，而cleaved caspase-3在10-7 mol/L AngⅡ组达到峰值（均P<0.01）。免疫荧光结果显示，与对照组相比，AngⅡ（10-9 mol/L）诱导的HK-2细胞中TUNEL+/RIP3+阳性率显著增高（P<0.01）；与AngⅡ诱导组相比，Nec-1可有效降低TUNEL+/RIP3+阳性细胞数，而zVAD可促使TUNEL+/RIP3+阳性细胞数目增高（均P<0.01）。结论程序性坏死和凋亡的发生与AngⅡ浓度、caspase活性等因素密切相关，且抑制HK-2细胞凋亡可促使细胞发生程序性坏死。AngⅡ诱导的程序性坏死和凋亡在肾小管上皮细胞进行性丧失中发挥了重要作用。

简介：摘要目的评价电针对内毒素性急性肾损伤(AKI)大鼠肾小管上皮细胞焦亡的影响。方法健康清洁级SD大鼠24只，雌雄不拘，体重160～182 g，6～8周龄，采用随机数字表法将大鼠分为4组(n＝6)：对照组(C组)、AKI组、电针+AKI组(EA组)和非穴位电针+AKI组(SEA组)。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg的方法制备内毒素血症模型。EA组于造模前5 d(1次/d)、造模当日LPS给药前30 min开始电针刺激，选择双侧足三里及肾俞穴，疏密波，频率15 Hz，刺激强度以大鼠出现轻微肌颤为宜，30 min/次，留针至LPS注射后6 h；SEA组刺激穴位旁开0.5 cm处。于LPS注射后6 h时，经心脏取血，采用全自动生化分析仪检测血清BUN和Cr浓度，采用ELISA法检测血清中性粒细胞白明胶酶脂蛋白(NGAL)、肾损伤分子-1(KIM-1)和IL-6和TNF-α浓度。处死大鼠取左侧肾皮质组织，采用TUNEL法确定肾小管上皮细胞焦亡率；取右侧肾皮质组织采用Western blot法检测caspase-1、IL-1β表达，采用RT-PCR检测caspase-1 mRNA和IL-1β mRNA的表达。结果与C组比较，AKI组血清BUN、Cr、NGAL、KIM-1、TNF-α和IL-6浓度升高，肾小管上皮细胞焦亡率升高，肾皮质caspase-1、IL-1β及其mRNA表达上调(P<0.05)。与AKI组比较，EA组血清BUN、Cr、NGAL、KIM-1、TNF-α和IL-6浓度降低，肾小管上皮细胞焦亡率降低，肾皮质caspase-1、IL-1β及其mRNA表达下调(P<0.05)，SEA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论电针减轻大鼠内毒素性AKI的机制可能与抑制肾小管上皮细胞焦亡有关。

简介：摘要目的在体内外实验中探讨中药组合物夏丹芪(冬虫夏草、丹参、黄芪)对小鼠氡暴露肺组织损伤的防治效果。方法建立氡暴露小鼠模型，分为健康对照组、氡暴露组和夏丹芪干预氡暴露组，每组6只。HE和Masson染色观察120 WLM时各组小鼠肺组织病理变化，免疫组织化学法检测肺组织α-SMA蛋白和Vimentin蛋白表达；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒检测各组肺组织氧化应激水平。同时，利用生态氡室构建氡暴露细胞模型和氡暴露+夏丹芪干预细胞模型，粘附试剂盒检测不同组细胞粘附能力；Transwell迁移实验确定各组细胞迁移能力；Western blot法检测各组细胞E-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。结果与氡暴露组相比，2 mg/g夏丹芪干预可使氡暴露小鼠肺组织MDA浓度降低(t＝4.43，P<0.05), SOD活性升高(t＝3.22，P<0.05)；肺组织α-SMA和Vimentin蛋白表达降低(t＝3.08、7.57，P<0.05)。在体外实验中，与单纯氡暴露组相比，150和200 μg/ml夏丹芪干预后氡暴露细胞迁移能力下降(t＝4.78、13.01，P<0.05)，细胞粘附性能增强(t＝3.41、12.55，P<0.05)；E-cadherin蛋白表达增高(t＝2.96、19.57，P<0.05)，Vimentin蛋白表达明显下降(t＝21.00、33.32，P<0.05)。结论中药组合物夏丹芪可通过降低辐射诱发的氧化应激、减弱氡暴露诱发的上皮细胞间质转化和纤维化，对氡暴露损伤具有一定的辐射防护作用，有望成为氡损伤的辐射防护剂。

简介：摘要目的探讨人鼻病毒1B (human rhinovirus 1B, HRV1B)感染对人肺支气管上皮细胞BEAS-2B代谢组改变的影响。方法HRV1B感染BEAS-2B细胞6 h和12 h后，采用非靶向代谢组学技术研究BEAS-2B细胞代谢组的改变情况。结果HRV1B感染BEAS-2B细胞6 h和12 h分别有93个差异显著代谢产物(differentially significant metabolites, DSMs)(上调47个DSMs、下调46个DSMs)和88个DSMs(上调37个DSMs、下调51个DSMs)；HRV1B感染动力学(HRV1B 6 h∶12 h)过程中共鉴定到30个DSMs(上调12个DSMs、下调18个DSMs)。3组中未知DSMs占据比例均较大。脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类的比例与HRV1B的感染时间呈现正相关，邻苯二甲酸二异壬酯等为HRV1B感染BEAS-2B细胞后的共同DSMs。结论HRV1B感染致BEAS-2B细胞的脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类代谢物发生明显改变。

简介：摘要目的探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)预处理组对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)冷缺氧/复氧(冷H/R)损伤导致的细胞凋亡的影响。方法HK2细胞株消化传代后采用计算机随机方法分为sham组(对照组)、冷缺氧/复氧组(冷H/R组，细胞冷缺氧4 h，复氧4 h)、HSYA预处理组(HSYA各亚组，缺氧前0.5 h给予不同剂量的HSYA，余同冷H/R组)。采用CCK-8法测细胞存活率；采用细胞爬片免疫组化法和免疫印迹法检测各组HK-2细胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达情况。结果(1)与冷H/R组相比，HSYA不同剂量可不同程度提高细胞存活率，但仅HSYA25 μmol/L组效果最显著(74.000±5.500与59.000±3.800, P<0.05)。(2)免疫细胞化学半定量评分：与冷H/R组相比，HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Caspase-3的表达明显降低[0(0，1)与8(6，8)，Z＝2.041，P<0.05和3.400±0.548与7.800±1.095，t＝11.000，P<0.01]；Bcl-2蛋白的表达明显升高(6.800±1.095与1.400±0.548，t＝10.590、P<0.01)；Bcl-2/Bax比值明显升高。(3)免疫印迹法检测蛋白：与冷H/R组相比，HSYA25 μmol/L组HK2细胞中Bax、Cleaved-Caspase-3和Pro-Caspase-3蛋白水平明显减少(0.707± 0.012与0.968±0.117，0.480±0.009与0.735±0.005，0.992±0.008与1.197±0.005，P均<0.01)；Bcl-2蛋白表达水平显著增加，Bcl-2/Bax比值明显增高(0.410±0.009与0.273±0.008，0.582±0.016与0.282±0.080，P均<0.01)。实验结果与免疫细胞化学结果相一致。结论HSYA可有效减少冷缺氧/复氧后HK2细胞的损伤。

简介：摘要目的分析不同分期慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者肾组织中发生程序性坏死的肾小管上皮细胞数量及其与临床病理指标的相关性，探讨肾小管上皮细胞程序性坏死在CKD患者肾小管上皮细胞过度死亡、慢性肾损伤进展中的作用。方法收集2017年6月至2019年6月于海南医学院第一附属医院行肾活检且估算肾小球滤过率（eGFR）≥15 ml·min-1·(1.73 m2)-1的60例18~65岁CKD患者的临床资料和肾组织活检标本。按照肾脏病预后质量指南（K/DOQI）分为CKD 1~4期，每期15例，以不伴有基础肾脏疾病的肾外伤患者为对照（n=15）。采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）+受体相互作用蛋白3（receptor-interacting protein 3，RIP3）免疫荧光、免疫组化技术分别检测不同时期CKD患者肾组织中发生程序性坏死的肾小管上皮细胞数和程序性坏死标志性蛋白RIP3、混合系激酶区域样蛋白（mixed lineage kinase domain-like protein，MLKL）的表达，并比较其差异。采用Pearson相关分析分析肾组织中程序性坏死肾小管上皮细胞百分数与临床病理指标的相关性。同时，也分析肾组织血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）表达及其与程序性坏死肾小管上皮细胞百分数的相关性。结果按CKD分期比较结果显示，随着CKD进展，CKD患者肾小管的结构破坏逐渐加重，相应区域的肾小管萎缩，伴间质纤维化；相邻区域肾小管灶性扩张、肾小管内可见大量蛋白管形。CKD 2、3期患者肾小管损伤分数明显高于对照组（均P<0.01）；TUNEL+RIP3免疫荧光染色结果显示，CKD 2、3期患者肾小管上皮细胞TUNEL、RIP3双阳性肾小管上皮细胞（程序性坏死细胞）百分数较高（均P<0.01）。免疫组化结果显示，CKD患者肾组织RIP3、MLKL和AT2R蛋白主要表达于肾小管上皮细胞胞质内，在CKD 2、3期患者肾小管上皮细胞胞质表达较高（均P<0.05）。Pearson相关分析结果显示，肾小管上皮细胞程序性坏死百分数与尿素氮（r=0.514，P=0.003）、血肌酐（r=0.507，P=0.019）、胱抑素C（r=0.571，P=0.026）、血尿酸（r=0.592，P=0.008）、肾小管损伤分数（r=0.901，P<0.001）、肾间质纤维化指数（r=0.700，P=0.001）及肾组织AT2R蛋白表达（r=0.715，P=0.001）呈正相关。结论在CKD进展中，患者肾小管上皮细胞发生了程序性坏死。程序性坏死可能是导致CKD患者肾小管上皮细胞过度死亡、慢性肾损伤不断进展的重要因素，并且肾小管上皮细胞程序性坏死可能与肾组织中高表达的AT2R相关。

简介：摘要目的探讨达格列净对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响。方法将HK-2细胞分成4组：正常对照组（negative control，NC）、高糖模型组（high glucose group，HG）、达格列净组（dapagliflozin，CS-179）和阳性对照二甲双胍组（positive control，PC）。给药作用24 h后，通过CCK-8法检测细胞存活率；通过多功能酶标仪测定ROS、SOD、CAT活力和MDA含量；Western blot法检测Nrf2蛋白的表达情况。结果CCK8结果显示，高糖模型组细胞存活率为58.0%±0.8%，达格列净组为87.0%±0.4%，达格列净能明显提高HK-2细胞存活率，差异有统计学意义（P<0.01）。酶标仪检测发现，与高糖模型组对比（ROS：3.46±0.05，MDA：25.37±0.61，SOD：55.89±4.09，CAT：10.22±1.67），达格列净能降低高糖导致的ROS（1.97±0.04）和MDA（9.5±0.4）的蓄积（均P<0.01），提高SOD（114.95±4.19）和CAT（32.83±2.01）的活力（均P<0.01）；与高糖模型组中Nrf2蛋白表达量（0.26±0.03）对比发现，达格列净组中Nrf2蛋白（0.48±0.03）的表达明显升高（P<0.01）。结论达格列净可改善高糖诱导的HK-2细胞损伤，其作用机制可能是通过降低HK-2细胞氧化损伤，激活Nrf2来发挥保护作用的。

简介：摘要急性肾损伤（AKI）是慢性肾脏病（CKD）的独立危险因素，可促进CKD发生与发展，这已成为需要高度重视的全球性公共卫生问题。然而，AKI向CKD转变的潜在机制尚未明了。肾小管上皮细胞（TEC）是肾脏重要组成部分，且在AKI过程中易受多种损伤因素的影响。TEC损伤在AKI向CKD转变中起到关键推动作用，具体机制包括TEC不完全修复、细胞信号通路活化、细胞器损伤、表观遗传学改变及TEC与其他细胞对话等，本文对此进行综述。

简介：摘要目的观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激对小鼠肾脏及人肾小管上皮细胞沉默信息调节因子3（silent information regulator 3，Sirt3）和线粒体动力学相关蛋白表达的影响，探讨Sirt3在LPS诱导的肾小管上皮细胞线粒体动力学异常中的作用。方法无特定病原体（SPF）级雄性C57BL/6小鼠18只，随机分为对照组、LPS 24 h组和LPS 48 h组，对照组腹腔注射生理盐水（0.1 ml/10 g），LPS 24 h组和LPS 48 h组腹腔注射LPS（10 mg/kg）溶液。全自动生化分析仪检测小鼠肾功能，HE染色观察肾组织病理变化，Western印迹法检测线粒体分裂相关蛋白线粒体动力相关蛋白1（dynamin-related protein-1，Drp1）、融合相关蛋白视神经萎缩相关蛋白A1（optic atrophy type 1，Opa1）及Sirt3的表达，免疫组化检测肾组织中Sirt3的表达及分布。体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2），Western印迹法检测10 μg/ml LPS刺激24 h后Drp1、Opa1及Sirt3的表达变化，Hoechst-33342染色检测细胞凋亡。pcDNA3.1-Sirt3重组质粒转染HK-2细胞过表达Sirt3后同上方法检测Sirt3、Drp1、Opa1的表达变化及细胞凋亡。结果（1）LPS组小鼠血肌酐、尿素氮明显高于对照组（均P<0.05），并出现典型病理改变。（2）LPS组小鼠肾组织线粒体分裂相关蛋白Drp1表达明显高于对照组，融合相关蛋白Opa1表达明显低于对照组（均P<0.05）。（3）LPS组小鼠Sirt3蛋白表达明显低于对照组（P<0.05），免疫组化结果表明Sirt3主要表达在肾小球血管内皮细胞和肾小管上皮细胞中。（4）LPS刺激可诱导HK-2细胞Drp1表达升高（P<0.05），Opa1及Sirt3表达下降（P<0.05），细胞凋亡增加（P<0.05）。（5）pcDNA3.1-Sirt3重组质粒转染HK-2细胞过表达Sirt3可减轻LPS诱导的线粒体动力学紊乱及细胞凋亡。结论LPS可诱导Sirt3表达下调及线粒体动力学紊乱，Sirt3可能通过调控线粒体动力学在LPS诱导的急性肾损伤中发挥保护作用。

简介：摘要目的评价富氢液对人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤时丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/核因子-E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法体外培养的人肾小管上皮细胞系，以1.5×104个/ml的密度接种于96孔培养板(200 μl/孔)或以2×105个/ml密度接种于6孔培养板(2 ml/孔)，采用随机数字表法分为5组(n＝30)：对照组(C组)置于常氧恒温培养箱(37 ℃、5%CO2-21%O2-74%N2)中培养28 h；富氢液组(H组)加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基，置于常氧恒温培养箱中孵育28 h；缺氧复氧组(H/R组)置于厌氧恒温培养箱(37 ℃、5%CO2-1%O2-94 %N2)中缺氧24 h，取出后置于常氧恒温培养箱复氧4 h；缺氧复氧+富氢液组(H/R+ H组)置于厌氧恒温培养箱中缺氧24 h，取出后加入含0.6 mmol/L富氢液的培养基，置于常氧恒温培养箱中复氧4 h；缺氧复氧+富氢液+Akt抑制剂Uprosertib组(H/R+ H+U组)加入终浓度为10 μmol/L的Uprosertib孵育1 h，其余处理同H/R+ H组。各组细胞处理结束后，采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术测定细胞凋亡率，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，硫代巴比妥酸法测定MDA含量，Western blot法检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、总Nrf2、核Nrf2和活化的caspase-3表达，RT-PCR法检测Nrf2 mRNA表达。结果与C组比较，H/R组和H/R+H组细胞活力和SOD活性下降，细胞凋亡率和MDA含量升高，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2、活化的caspase-3和Nrf2 mRNA表达上调(P<0.05)；与H/R组比较，H/R+H组细胞活力和SOD活性升高，细胞凋亡率和MDA含量降低，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达上调，活化的caspase-3表达下调(P<0.05)；与H/R+H组比较，H/R+ H+U组细胞活力和SOD活性下降，细胞凋亡率和MDA含量升高，p-Akt、核Nrf2、总Nrf2和Nrf2 mRNA表达下调，活化的caspase-3表达上调(P<0.05)。结论富氢液减轻人肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤的机制与促进Akt/Nrf2信号通路激活，降低氧化应激水平，抑制细胞凋亡有关。

简介：摘要目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）/核因子κB（NF-κB）信号通路在人肾小管上皮细胞（human kideny-2，HK-2）-尿酸性肾病细胞模型中表达水平变化及其作用机制。方法体外培养HK-2细胞，随机分为对照组及实验组。实验组经高尿酸（720 μmol/L）浸泡48 h建立体外尿酸性肾病细胞模型，分为高尿酸处理组、过表达蛋白激酶活化受体2（protease activated receptor 2，PAR2）组和敲减PAR2组。实时定量PCR法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA表达水平，Western印迹法检测HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB蛋白表达水平，酶联免疫吸附法检测上清液肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β前体（pro-interleukin-1β，pro-IL-1β）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）表达水平。结果（1）与对照组相比，高尿酸处理组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1增加（均P<0.01）。（2）与高尿酸处理组相比，过表达PAR2组HK-2细胞中PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显增加（均P<0.05），上清液中TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-1β、TGF-β1明显增加（均P<0.05）。（3）与高尿酸处理组相比，敲减PAR2组HK-2细胞PAR2、PI3K、AKT、NF-κB的mRNA及蛋白表达明显下降（均P<0.05），上清液中IL-6、pro-IL-1β、IL-1β、TGF-β1明显减少（均P<0.05）。结论尿酸致肾脏HK-2细胞损伤过程中，尿酸通过激活PAR2显著上调PI3K/AKT/NF-κB信号通路表达，导致HK-2细胞炎症损伤明显加重。敲减PAR2抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路，可有效减轻HK-2细胞炎症损伤。

简介：摘要目的探讨沉默FAM83D对X线照射后食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、存活能力及侵袭、迁移能力的影响及机制。方法采用免疫组化法检测69例ESCC患者组织中FAM83D、E-cadherin、vimentin的表达。免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞FAM83D基因沉默效果。MTS、克隆形成实验和Transwell方法检测ECA109、KYSE30细胞增殖活性、存活能力及侵袭能力。流式细胞术和免疫印迹法检测ECA109、KYSE30细胞凋亡分布、上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白表达。结果ESCC组织中55%(38/69) FAM83D强表达，36%(25/69) E-cadherin强表达，61%(42/69) vimentin强表达；FAM83D强表达与E-cadherin强表达呈负相关(r＝-0.350，P<0.01)，与vimentin强表达呈正相关(r＝0.470，P<0.01)。ECA109、KYSE30细胞沉默FAM83D后降低了FAM83D蛋白表达(P<0.01)。MTS和克隆形成实验数据显示照射后沉默FAM83D显著抑制了ECA109、KYSE30细胞增殖水平(P<0.05)、增加了放射敏感性(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞侵袭力降低(P<0.01)、E-cadherin表达增加，而N-cadherin、vimentin、Snail、p-Akt、p-GSK-3β表达降低(P<0.01)。照射后FAM83D shRNA组ECA109、KYSE30细胞凋亡率明显增加(P<0.01)，同时Bcl-2、Mcl-1表达下调，Cleaved caspase-3的表达上调(P<0.01)。结论FAM83D与ESCC的侵袭发展密切相关。沉默ECA109、KYSE30细胞FAM83D表达联合X线照射降低了其增殖、侵袭和存活能力，诱导了细胞凋亡，增加了放射敏感性，该作用可能通过Snail/Akt/GSK-3β信号途径来调控EMT。

简介：摘要目的探讨微小RNA(microRNA，miRNA)-34a和miRNA-204的异常表达是否能用于区别慢性胰腺炎(CP)与胰腺导管上皮内瘤变(PanINs)。方法用部分结扎大鼠胆胰管和置入7，12-二甲基苯并蒽(DMBA)的方法建立SD大鼠(华中科技大学实验动物中心提供)CP-胰腺癌模型，获得16个CP标本和26个PanINs标本。然后用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测4种与胰腺癌相关的miRNAs(miR-34a、miR-204、miR-107和miR-21)在这些标本中的表达。两组之间的差异用方差分析、Kruskal-Wallis检验或Student’s t检验进行统计学分析。结果miR-34a在PanIN-1(1.81±0.12比1.00±0.08，t＝2.032，P<0.05)、PanIN-2(1.72±0.11比1.00±0.08，t＝1.332，P<0.05)和PanIN-3(2.62±0.14比1.00±0.08，t＝4.135，P<0.05)标本中的表达显著高于CP组，差异有统计学意义。miR-204在PanIN-2(0.59±0.08比1.00±0.12，t＝5.037，P<0.05)和PanIN-3(0.51±0.07比1.00±0.12，t＝5.385，P<0.05)标本中的表达显著低于CP组，差异有统计学意义。miR-21只在PanIN-3(2.23±0.21比1.00±0.12，t＝4.485，P<0.05)标本中表达显著高于CP组，差异有统计学意义。结论miR-34a和miR-204在CP发展到胰腺癌的过程中表达异常，可用于区别CP与PanINs。